ATCC细胞在不加任何条件下直接冻存时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
ATCC细胞可能由于各种原因相互附着并发生结团。细胞结团的常见的原因是在细胞裂解之后，培养基中存在游离DNA和细胞碎片，DNA的粘性使细胞和其他碎片聚集成大的团块。以下是细胞裂解和DNA被释放到培养基中的一些原因：
1.消化过度：过度使用蛋白水解酶可能会导致细胞结团。
2.环境应力：机械力、反复冻融循环和其他环境应力可加速细胞死亡，早期现象可能是细胞和细胞粘附。
3.组织分解：通过化学、机械或酶法从初生组织制备单细胞悬浮液可能会导致一些细胞破裂。从组织制备单细胞悬浮液时，通常需要胶原酶消化细胞外基质。
4.过度生长：当细胞达到融合状态时，细胞碎片和细胞裂解产生的游离DNA就会堆积过多。
那么我们该如何预防细胞结团呢？细胞结团会减少细胞对关键营养素的获取，从而阻碍整体细胞的生长。细胞结团还会影响需要清洁制备单个细胞的下游检测，根据结团的根本原因，下找出合理的解决方案：
1.细胞裂解与DNA释放：DNaseⅠ可用于组织降解以及常规细胞培养过程中，以防止多种类型细胞的结团。
注意：DNaseⅠ在二价离子（如Mg2+，Ca2+）存在时活性大。
2.二价阳离子：柠檬酸盐和EDTA等螯合剂可以用于去除细胞培养基中的钙离子。也可使用无血清、无Ca2+/Mg2+平衡盐溶液。
3.细胞密度：细胞在传代前，参考细胞系文献或者已知的特性来获取推荐的细胞密度。
4.操作：在进行细胞分离时，应小心处理细胞并使用适当的离心机设置。微小的结团可以通过搅碎，或者轻柔地上下吹打细胞来解决。
5.支原体污染：处理掉被污染的细胞，消毒培养室和细胞培养箱。遵循良好的实验室规范以避免污染。
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